文献分享:广谱性谷蛋白肽-HLA-DQ2.5复合物中和抗体的表征
2024-01-04
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乳糜泻 (Celiac disease, CeD),麸质敏感性肠病,也称为谷蛋白敏感性肠病:是一种与麸质谷蛋白摄入有关的小肠自身免疫性疾病。含有小麦、大麦或黑麦的食物中都存在麸质谷蛋白,当乳糜泻患者摄入了含有麸质谷蛋白的食物后,患者体内麸质特异性CD4+T细胞可在疾病相关的人类白细胞抗原 (HLA) 分子(大多数患者携带HLA-DQ2.5)的背景下识别麸质,小肠粘膜会发生免疫过敏反应导致小肠粘膜破坏,以至小肠无法从食物中吸收营养物质。

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(数据来源Katri L, et al. Nat Rev Dis Primers. 2019)

迄今为止,还没有批准的药物可以治疗CeD,唯一可用的治疗方法是终身无麸质饮食(GFD)。鉴于麸质特异性T细胞在CeD发病机制中的核心作用,最近中外制药有限公司研究人员报道开发了一种具有广泛反应性、高亲和力的双特异性TCR样抗体DONQ52,它与超过25种不同的麸质pHLA-DQ2.5结合,包括所有免疫显性表位,并在体外和体内阻断麸质依赖性免疫激活,同时保持全身免疫力,有望为CeD干预治疗提供新的解决思路。

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 pHLA-DQ2.5构建表达:

分别构建HLAa链和β链表达载体,生产可溶性MHC II类分子HLA-DQ2.5:33mer(LQLQPFPQPELPYPQPELPYPQPELPYPQPQPF)复合物,用于抗体开发免疫原,筛选原(33mer麦醇溶蛋白肽含有多个致病表位,例如DQ2.5-glia-α1a、DQ2.5-胶质细胞-α2 和 DQ2.5-胶质细胞-α1b)。 

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(数据来源Bianchi M, et al. Immunity. 2018)

单B细胞兔单抗筛选:

使用重组HLA-DQ2.5:33mer免疫兔子后,基于公司内部兔单抗开发平台,对来自免疫兔子的B细胞进行荧光激活单细胞分选与HLA-DQ2.5:33mer结合的B细胞,并进一步筛选检测其与HLAI各种肽I(pHLAII)的结合。选择与麸质pHLA-DQ2.5广泛交叉反应的抗体DQN0344xx 和 DQN0385ee作为候选分子。

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(数据来源Chugai Pharmaceutical Co., Ltd)

DONQ52双抗改造:

将两种原始抗体DQN0344xx和DQN0385ee人源化,在保持抗体特异选择性、药代动力学 (PK)、理化特性和免疫原性基础上,对抗体的重链和轻链进行了广泛的突变优化,逐一筛选DQN0344xx和DQN0385ee最佳有效突变,并采用FAST-Ig双抗平台生成DONQ52双抗,同时改造Fc增强酸性pH 条件下与新生儿Fc受体的结合,改善PK并减少与Fc gamma受体和C1q的结合以消除ADCC,CDC效应功能。

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DONQ52体外表征:

使用一组都多种多肽HLA-DQ2.5复合物测试了DONQ52的结合选择性。DONQ52对致病性麸质多肽HLA-DQ2.5复合物具有广泛的反应性,同时证明与所有测试的麸质无关多肽HLA-DQ2.5复合物分子没有实质性结合。

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DONQ52体外广泛中和:

DONQ52剂量依赖性抑制特异性TCR的人CD4+T细胞产生IL-2,针对5个免疫显性表位(DQ2.5-glia-α1a、DQ2.5-glia-α2、DQ2.5-glia-ω1、DQ2 .5-glia-ω2 和 DQ2.5-hor-3a)和6个额外的CeD相关表位(DQ2.5-glia-α1a、DQ2.5-glia-γ1、DQ2.5-glia-γ2、DQ2.5 -glia-γ3、DQ2.5-glia-γ4a、DQ2.5-glia-γ4d)均具有中和作用。

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DONQ52交叉反应性结构基础:

通过分析抗体片段Fab与抗原之间复合物的x射线晶体结构,揭示了DONQ52的每个臂在结构上识别不同氨基酸序列的多个谷蛋白表位: DQN0344xx上CDR3-VH 中的 Tyr100a (Tyr100b、Tyr99) 和 DQN0385ee上CDR2-VL (CDR1-VL) 中的 Tyr-50 (Tyr32) 似乎在与各种麸质多肽HLA-DQ2.5复合物的广泛结合中具有关键作用。

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 DONQ52药代动力学:

通过进行单剂量PK分析,DONQ52具有较长的半衰期和较高的皮下生物利用度,且不影响麸质摄入。 

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DONQ52体内活性:

使用HLA-DQ2.5:33mer或KLH蛋白体内免疫诱导小鼠抗原反应性T细胞,腹膜内给药,DONQ52 特异性阻断了33mer蛋白肽依赖性T细胞诱导,同时不影响对 KLH 的反应。

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汇总:

DONQ52为一种双特异性形式的新型TCR样抗体,可广泛中和超过25种不同的麸质多肽HLA-DQ2.5复合物,为CeD提供有效、安全且对患者友好的潜在治疗方法,目前I期临床试验正在进行中。

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