近年来,随着人们对抗体的了解越来越深入,抗体工程技术不断发展,抗体质谱测序、单细胞测序和杂交瘤细胞测序等技术得到广泛应用,为抗体的研究和应用提供了更多的手段和途径。
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(数据来源Snapkov I, et al. Trends Biotechnol. 2022)
抗体测序解决抗体研发领域的很多问题:比如某些杂交瘤表达量低或者优质抗体丢失了,或者用于进一步通过改造抗体来提升性能等,这些都是抗体测序技术的应用范畴。下面我们来看看杂交瘤测序及抗体质谱测序的流程:
杂交瘤细胞测序
目前已有多种方法对杂交瘤细胞或淋巴细胞的抗体可变区进行测序。例如高通量RNA测序,该方法被证明具有很高的准确性,可以对抗体库进行深度分析。然而,大多数实验室并不熟悉高通量测序技术,这些技术需要具备RNA-seq文库制备和计算分析的专业知识;此外,高通量文库制备和测序的成本可能很高,测序周期可能为数周至数月。主流杂交瘤细胞测序则是通过设计抗体通用引物扩增单克隆细胞株的抗体可变区序列,基于PCR的方法进行抗体可变区一代测序,从而获得抗体基因序列信息。
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(杂交瘤细胞测序流程)
抗体质谱测序
从头抗体测序是基于高质量LC-MS/MS光谱直接测序的新方法,LC-MS/MS已成为新蛋白质测序的标准技术,毛细管电泳为液相色谱提供了补充信息,正迅速发展为自下而上的蛋白质组学,并广泛用于单克隆抗体的肽图谱、完整抗体研究和抗体-药物结合物分析。
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(抗体质谱测序流程)